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一、技術(shù)簡(jiǎn)介CLIP(Cross-linkingimmunoprecipitation,交聯(lián)免疫共沉淀)通過(guò)結(jié)合UV交聯(lián)和免疫共沉淀的方法來(lái)分析蛋白與RNA相互作用的結(jié)合位點(diǎn)。二、技術(shù)原理CLIP技術(shù)利用紫外線(xiàn)照射使細(xì)胞內(nèi)的RNA與RNA結(jié)合蛋白(RBP)發(fā)生共價(jià)交聯(lián),隨后通過(guò)免疫沉淀的方法富集與特定RBP結(jié)合的RNA片段,再經(jīng)過(guò)逆轉(zhuǎn)錄和高通量測(cè)序等步驟,獲取RBP在體內(nèi)的RNA結(jié)合位點(diǎn)和結(jié)合序列信息。三、應(yīng)用場(chǎng)景1.蛋白質(zhì)-RNA相互作用研究:確定特定蛋白質(zhì)在體內(nèi)的RNA結(jié)...
一、技術(shù)簡(jiǎn)介RIP(RNAImmunoprecipitation,RNA免疫沉淀)技術(shù)是一種用于研究細(xì)胞內(nèi)RNA與蛋白質(zhì)相互作用的關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)方法,能夠揭示RNA結(jié)合蛋白(RBP)在轉(zhuǎn)錄后調(diào)控中的功能機(jī)制。二、技術(shù)原理RIP利用針對(duì)目標(biāo)蛋白的抗體把相應(yīng)的RNA-蛋白復(fù)合物沉淀下來(lái),通過(guò)分離純化,對(duì)結(jié)合在復(fù)合物上的RNA進(jìn)行RT-PCR驗(yàn)證或測(cè)序分析,結(jié)果更具生物學(xué)說(shuō)服力。三、應(yīng)用場(chǎng)景1.基礎(chǔ)機(jī)制:解析RNA結(jié)合蛋白(如AGO2、Polycomb復(fù)合物)的功能及RNA調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。2....
一、技術(shù)簡(jiǎn)介ChIP(染色質(zhì)免疫共沉淀)是一種研究蛋白質(zhì)與DNA相互作用的關(guān)鍵技術(shù),廣泛應(yīng)用于轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)鑒定、表觀(guān)遺傳修飾分析等領(lǐng)域。二、技術(shù)原理利用抗原抗體的特異性結(jié)合,將與目的蛋白相結(jié)合的DNA片段沉淀下來(lái),能夠真實(shí)地反映結(jié)合在DNA序列上的調(diào)控蛋白。三、應(yīng)用場(chǎng)景1.轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究:鑒定轉(zhuǎn)錄因子(如p53、NF-κB)的DNA結(jié)合位點(diǎn)。2.表觀(guān)遺傳學(xué):分析組蛋白修飾(如H3K27me3)在基因沉默中的作用。3.疾病機(jī)制:探索癌癥中異常蛋白(如MYC)的基因組結(jié)合模式。...
一、技術(shù)簡(jiǎn)介IP(免疫沉淀,Immunoprecipitation)和Co-IP(免疫共沉淀,Co-Immunoprecipitation)是研究蛋白質(zhì)功能及相互作用的核心技術(shù),廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域。二、技術(shù)原理IP通過(guò)特異性抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合,利用抗體將靶標(biāo)蛋白(即抗原)分離出來(lái),從而檢測(cè)某一種蛋白的表達(dá)情況;而CO-IP是在IP基礎(chǔ)上,驗(yàn)證蛋白質(zhì)間的相互作用。通過(guò)捕獲一個(gè)蛋白(誘餌蛋白),檢測(cè)與其結(jié)合的互作蛋白(靶蛋白),從而特異性富集所研究的目的蛋白,進(jìn)...
在細(xì)胞生物學(xué)研究、生物制藥等前沿領(lǐng)域,細(xì)胞培養(yǎng)基為細(xì)胞生長(zhǎng)繁衍提供關(guān)鍵養(yǎng)分與適宜環(huán)境。掌握其正確使用方法,才能讓細(xì)胞蓬勃生長(zhǎng),助力科研突破與產(chǎn)業(yè)革新。開(kāi)啟培養(yǎng)前,依據(jù)細(xì)胞種類(lèi)、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮Y選培養(yǎng)基,如貼壁生長(zhǎng)的癌細(xì)胞系多用含血清、葡萄糖、氨基酸及多種生長(zhǎng)因子的RPMI-1640培養(yǎng)基;原代細(xì)胞培養(yǎng)常選營(yíng)養(yǎng)成分豐富、成分貼近體內(nèi)環(huán)境的DMEM培養(yǎng)基,且需添加適量抗生素,像青霉素、鏈霉素,防止微生物“偷襲”,搭建安全“保育箱”。配制環(huán)節(jié)嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)稱(chēng)取培養(yǎng)基粉末,溶解于超純水中,用...
原代心肌細(xì)胞間質(zhì)并非單一物質(zhì),而是由多種成分巧妙交織而成的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)。其中,膠原蛋白是極為重要的組成部分。它如同堅(jiān)韌的繩索,為心肌細(xì)胞提供穩(wěn)固的支撐框架。在心臟每一次有力的搏動(dòng)中,膠原蛋白承受著巨大的機(jī)械應(yīng)力,確保心肌細(xì)胞不會(huì)因過(guò)度拉伸或扭曲而受損,維持著心臟結(jié)構(gòu)的完整性,使其能夠在漫長(zhǎng)的生命周期中持續(xù)穩(wěn)定地工作。彈性纖維也在其中扮演著重要角色。它們賦予心肌組織一定的彈性和回縮力。當(dāng)心臟收縮時(shí),彈性纖維被拉伸儲(chǔ)存能量;而當(dāng)心臟舒張時(shí),又能釋放能量輔助心臟恢復(fù)到原來(lái)的形狀,讓心臟...
在生命科學(xué)的微觀(guān)世界里,細(xì)胞凋亡檢測(cè)對(duì)剖析疾病機(jī)理、研發(fā)藥物至關(guān)重要。諸多檢測(cè)方法各展其長(zhǎng),共同揭開(kāi)凋亡神秘面紗。形態(tài)學(xué)觀(guān)察是基礎(chǔ)“視窗”。光學(xué)顯微鏡下,經(jīng)特定染色(如吉姆薩染色),凋亡細(xì)胞體積縮小、核質(zhì)濃縮,與周?chē)<?xì)胞形成鮮明對(duì)比;熒光顯微鏡利用霍echst等染料,讓凋亡細(xì)胞核亮起藍(lán)白熒光,呈致密塊狀或碎片狀,直觀(guān)呈現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)異變,為初步判斷提供依據(jù)。電子顯微鏡則更進(jìn)一步,超高倍放大下,清晰可見(jiàn)凋亡細(xì)胞膜出芽、氣泡狀結(jié)構(gòu),線(xiàn)粒體腫脹皺縮,從細(xì)微處洞察凋亡特征。生化檢測(cè)聚...
在生命科學(xué)與醫(yī)學(xué)研究的廣袤領(lǐng)域中,耐藥細(xì)胞株的建立吸引著眾多科研工作者深入探尋。這一過(guò)程不僅涉及復(fù)雜的細(xì)胞生物學(xué)機(jī)制,更關(guān)乎對(duì)疾病本質(zhì)的深刻理解以及新藥研發(fā)的希望曙光。耐藥細(xì)胞株的建立往往始于對(duì)特定藥物敏感的細(xì)胞群體。這些細(xì)胞在適宜的培養(yǎng)環(huán)境下生長(zhǎng)繁殖,如同一個(gè)訓(xùn)練有素的軍團(tuán),遵循著既定的生命規(guī)律。然而,當(dāng)持續(xù)暴露于逐漸增加濃度的藥物環(huán)境中時(shí),藥物如同洶涌的潮水,不斷沖擊著細(xì)胞的生存防線(xiàn),而細(xì)胞則在這場(chǎng)生存挑戰(zhàn)中開(kāi)始發(fā)生微妙的變化。起初,部分細(xì)胞憑借自身固有的一些隨機(jī)突變或特...
在生命科學(xué)的浩瀚海洋中,細(xì)胞作為生命的基本單元,承載著無(wú)盡的奧秘與可能。為了深入探索這些微小世界的規(guī)律,科學(xué)家們常常需要對(duì)特定的細(xì)胞進(jìn)行追蹤、觀(guān)察和研究。此時(shí),標(biāo)記細(xì)胞株便成為了他們手中的“精準(zhǔn)指南針”。這是通過(guò)特定的方法將某種標(biāo)記物引入細(xì)胞株中,使其能夠被準(zhǔn)確地識(shí)別和追蹤。這種標(biāo)記物可以是熒光蛋白、抗體、磁性微粒等,它們各自具有性質(zhì)和優(yōu)勢(shì),能夠滿(mǎn)足不同實(shí)驗(yàn)需求。細(xì)胞株的作用首先體現(xiàn)在細(xì)胞追蹤與定位上。在復(fù)雜的生物體內(nèi)或細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中,特定細(xì)胞的行蹤往往是科研人員關(guān)注的焦點(diǎn)。...
在醫(yī)學(xué)和生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域,耐藥細(xì)胞株的出現(xiàn)無(wú)疑是一個(gè)令人矚目的挑戰(zhàn)。這些細(xì)胞株因長(zhǎng)期暴露于藥物環(huán)境中而逐漸產(chǎn)生了對(duì)藥物的耐受性,使得原本有效的藥物在它們面前失去了威力,為疾病的治療帶來(lái)了重重困難。耐藥細(xì)胞株的形成是一個(gè)復(fù)雜而多樣的過(guò)程。細(xì)胞在藥物的持續(xù)壓力下,可能通過(guò)基因突變、基因表達(dá)改變、藥物外排泵的激活等多種機(jī)制,逐漸獲得了對(duì)藥物的抗性。這些耐藥細(xì)胞不僅能夠在藥物存在的環(huán)境中存活,甚至還能增殖,將耐藥性傳遞給后代細(xì)胞,從而形成穩(wěn)定的耐藥細(xì)胞株。這種耐藥性的出現(xiàn),往往與藥物...
原代細(xì)胞的應(yīng)用領(lǐng)域廣泛,主要包括以下幾個(gè)方面:一、基礎(chǔ)研究1、分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究:原代細(xì)胞保留了體內(nèi)原始組織的生物學(xué)特征,如生長(zhǎng)和衰老等特性,是研究基因功能、蛋白質(zhì)組學(xué)、基因組學(xué)、細(xì)胞株(系)研究、DNA、RNA和遺傳學(xué)研究等的理想模型,可幫助科學(xué)家更準(zhǔn)確地了解細(xì)胞在生理狀態(tài)下的分子機(jī)制和生命活動(dòng)規(guī)律。2、疾病機(jī)理研究:通過(guò)原代細(xì)胞建立的疾病模型,能夠更好地模擬疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程,有助于深入研究疾病的發(fā)病機(jī)制。例如,利用原代肝細(xì)胞研究肝炎、肝硬化等肝臟疾病的發(fā)病機(jī)制;...
細(xì)胞培養(yǎng)基的主要類(lèi)型包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基、無(wú)血清培養(yǎng)基以及化學(xué)成分確定的培養(yǎng)基等。以下是這些培養(yǎng)基類(lèi)型的具體介紹:1、基礎(chǔ)培養(yǎng)基定義與特點(diǎn):基礎(chǔ)培養(yǎng)基是一種合成培養(yǎng)基,其成分模仿天然培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分,通過(guò)化學(xué)物質(zhì)模擬合成。這類(lèi)培養(yǎng)基通常含有氨基酸、碳水化合物、無(wú)機(jī)鹽、維生素及其他輔助成分。適用細(xì)胞類(lèi)型:基礎(chǔ)培養(yǎng)基適用于多種已建立的細(xì)胞系和不同地方的哺乳動(dòng)物細(xì)胞類(lèi)型的培養(yǎng)。。2、無(wú)血清培養(yǎng)基定義與特點(diǎn):無(wú)血清培養(yǎng)基不含動(dòng)物源成分,旨在支持體外細(xì)胞的生長(zhǎng)和維持,而無(wú)需補(bǔ)充血清。這類(lèi)培...
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